01
扩增：PCR 管里只有引物Ⅰ
每点一次“进行循环”，PCR 仪就自动完成一次“变性 → 复性 → 延伸”。先预测，再观察第 1～4 次循环的产物。完成 4 次循环后进入结果展示。
本次反应体系
扩增缓冲液dNTP引物Ⅰ引物Ⅱ（未加入）Taq DNA 聚合酶模板 DNA无菌水
- 原始母链（模板）
- 新合成的子链
- 引物Ⅰ
- 目的基因（Bt 基因）区段
- 耐高温的 DNA 聚合酶
循环开始前
变性 94 ℃复性 55 ℃延伸 72 ℃
25.0 ℃
示意图：模板 DNA 只画出含目的基因的一段，引物和目的基因都画得比实际短。背景里的小点代表 4 种脱氧核苷酸（dNTP），短线代表溶液中大量游离的引物Ⅰ。
先预测，再循环
第 1 次循环结束后：
循环开始前
| 新合成的子链（条） | 0 |
|---|---|
| 双链 DNA 分子（个） | 1 |
| 单链 DNA（条） | 0 |
| 两条链等长的 DNA 分子（个） | 0 |
对照：两种引物时，第 0 次循环结束有 1 个 DNA 分子，其中两条链等长的 0 个。
02
结果展示：循环到第 30 次
拖动滑块或点击柱形，看只有引物Ⅰ时，每次循环后的产物有多少，并与两种引物的正常 PCR 对比（以 1 个 DNA 分子为起始模板，按理想情况计算）。
已完成循环30
前 4 次你已经在 PCR 管里看过了。
新合成的子链（条）—= n，每次循环只多 1 条
两条链等长的 DNA 分子（个）0始终为 0
消耗的引物Ⅰ（个）—= n
对照：两种引物时的 DNA 分子（个）—2ⁿ 个
只有引物Ⅰ：新合成的子链条数
柱子高度一次只增加 1：产物按 1、2、3……线性增加。
与两种引物的正常 PCR 对比
结论
- 只有引物Ⅰ时，引物只能与一条母链结合，每次循环只能以同一条母链为模板合成 1 条子链；新合成的子链上没有引物Ⅱ可以结合，不能再作为模板。所以产物按 n 线性增加，n 次循环只得到 n 条子链。
- 这些子链一端是引物Ⅰ，另一端一直延伸到模板的末端，比目的基因长，而且大多以单链形式存在，得不到两条链等长的目的基因片段。
- 加入两种引物时，新合成的子链又能和另一种引物结合、作为模板，DNA 分子数按 2ⁿ 指数增加，第 3 次循环开始出现两条链等长的目的基因片段。所以 PCR 需要两种引物，分别与目的基因两条模板链的 3′ 端结合。